Главная страница
Контакты
Публикации
Тематика журнала
Подписка
Вниманию авторов
Редколлегия
In English
|  |
Сахно Л.А., Сытник Е.С., Комарницкий И.К., Кучук Н.В., Климюк В.И.
Активность системы Spm транспозонов кукурузы у трансгенных растений Orychophragmus violaceus (L.) O.E.Schulz., полученных путем как прямого переноса ДНК в протопласты, так и агробактериальной трансформацией корневых эксплантов
Цитология и генетика 2002, том 36, N 6, 3-8
Одним из подходов к клонированию уникальных генов является использование инсерционного мутагенеза с помощью транспозонов. Объектом исследования был Orychophragmus violaceus (L.) O.E.Schulz – дикий вид из семейства крестоцветных, представляющий интерес для практической селекции как донор улучшенного состава растительного масла. Для генетической трансформации использовали конструкцию, которая включает селективный NPT II-ген, репортерный GUS-ген, структурный BAR-ген, находящийся в границах неавтономного транспозона dSpm, и Spm-транспозазу (SpmTPase) кукурузы. GUS-ген не активен, так как отделен от 35S промотора инсерцией dSpm элемента и становится функциональным только после dSpm транспозиции. Трансгенные растения Orychophragmus violaceus (L.) O.E.Schulz были получены с помощью методов прямой (обработка ПЭГ в присутствии ДНК) трансформации мезофильных протопластов, а также Agrobacterium tumefaciens-опосредованной трансформации корневых эксплантов. Встраивание в геном всех перечисленных генов и явление транспозиции подтверждено с помощью гистохимического анализа GUS-активности и ПЦР-анализа. Относительная эффективность трансформации при использовании протопластов составила 5,8 %.
|
